RFLP i aplikacije za analizu DNA

Polimorfizam (RFLP) je molekularna metoda genetske analize koja omogućuje prepoznavanju pojedinaca na temelju jedinstvenih uzoraka rezanja restrikcijskog enzima u specifičnim regijama DNA.

Također se spominju kao RFLP analiza, tehnika koristi polimorfizme u genetskim kodovima pojedinca. Iako svi pripadnici neke vrste imaju bitno istu genetsku šminku, te male razlike predstavljaju varijacije u fenotipu, kao što su izgled ili metabolizam, između pojedinaca.

RFLP: Tehnika analize i primjene

RFLP tehnika analize uključuje rezanje određene regije DNA s poznatom varijabilnošću, s restrikcijskim enzimima, zatim odvajanje DNA fragmenata elektroforezom agaroza gel i određivanje broja fragmenata i relativnih veličina.

Restrikcijski enzim je enzim, protein molekula, koja smanjuje DNA na restrikcijskim mjestima. U osnovi, DNA uzorak je razbijen i digestiran restrikcijskim enzimima. Rezultirajući fragmenti odvajaju se u skladu s njihovim duljinama, a uzorak veličina fragmenata će se razlikovati za svakog ispitanika.

Puni RFLP postupak zahtijeva označavanje sonde, fragmentaciju DNA, elektroforezu, blot, hibridizaciju, pranje i autoradiografiju. Otkriveni RFLP se vizualizira pomoću rendgenskog filma u autoradiografiji, gdje se fragmenti DNA mogu pregledati i analizirati nakon što se odvoje jedan od drugog elektroforezom.

Neke od aplikacija za RFLP analizu uključuju:

• Otisaka prstiju DNA. Forenzični znanstvenici mogu koristiti RFLP analizu kako bi identificirali osumnjičene na temelju dokaznih uzoraka sakupljenih na prizorima zločina.
• Očinstvo. RFLP se također koristi za određivanje očinstva ili za praćenje podrijetla.
• Genetska raznolikost. Tehnika se može koristiti za proučavanje evolucije i migracije divljih životinja, proučavanje obrazaca uzgoja u populaciji životinja i otkrivanje i dijagnozu određenih bolesti.

Tehnika korištenja RFLP detekcije varijacija u genomima je vitalni alat za mapiranje genoma i analizu genetske bolesti. Ako se mjesto određenog gena za bolest traži u određenom kromosomu, tada bi istraživači analizirali DNK članova obitelji s tom bolešću, a zatim potražili slične uzorke nasljeđivanja u RFLP alelima.

Nakon što je genetska bolest lokalizirana, provođenje RFLP analize na drugim članovima obitelji moglo bi otkriti nosač mutantnih gena ili signal ukupnog rizika od bolesti. Važno je napomenuti da RFLP tehnika nije široko upotrebljavana sada kada se koriste nove i robusnije tehnike za analizu DNA u forenzičkoj znanosti i nekoliko drugih područja.

Negativni aspekti

Nažalost, RFLP tehnika analize je dosadna i spora. Osim što zahtijeva veliku količinu DNK uzoraka - uzorak bi obično trebao biti otprilike veličine četvrtine, što je relativno veliko za uzorke DNA - proces, od oznake sonde do pranja i autoradiografije, može potrajati do puni mjesec za dovršetak.

Rezultati projekta Human Genome prilično su zamijenili potrebu za RFLP. Projekt je omogućio određivanje cjelokupnog slijeda DNA pronađenih u ljudskim stanicama, ljudskom genomu i za identificiranje svih gena u ljudskom genomu.