Kako napraviti TBE pufer u 3 jednostavna koraka

TBE pufer je puferska otopina sastavljena od Tris baze, borne kiseline i EDTA (ili Tris-borat-EDTA zajedno). Ovaj pufer se često koristi za elektroforezu agarozne gage u analizi DNA produkata koji nastaju uslijed PCR amplifikacije, protokolima pročišćavanja DNA ili eksperimentima kloniranja DNA.

TBE pufer je osobito koristan za odvajanje manjih fragmenata DNA (MW <1000), kao što su mali produkti razgradnje restrikcijskog enzima. TBE ima veći puferski kapacitet i daje oštriju rezoluciju od TAE pufera. TAE pufer je otopina sastavljena od baze Tris, octene kiseline i EDTA (Tris-acetat-EDTA).

TBE je općenito skuplji od TAE i inhibira DNA ligazu, što može uzrokovati probleme ako su namjeravani kasniji postupci za pročišćavanje DNA i ligaciju. S tri jednostavna koraka koji slijede, saznajte kako napraviti TBE tampon. Ne bi trebalo trajati više od 30 minuta da bi se stvorio ovaj međuspremnik. Evo kako:

Stock otopina EDTA

Prije nego što je potrebno pripremiti otopinu EDTA (etilendiamin tetraoctena kiselina). EDTA neće ući potpuno u otopinu dok se pH ne podešava na oko 8.0. Za 500 ml mljevene otopine 0,5 M EDTA, izvagati 93,05 dinata dinatrijeve soli EDTA (FW = 372,2). Zatim je otopi u 400 ml deionizirane vode i podesi pH s NaOH. Nakon toga, napunite otopinu do konačnog volumena od 500 mililitara.

Stock rješenje TBE

Napravite koncentriranu (5x) zalihu otopine TBE mase 54 g Tris baze (FW = 121,14) i 27,5 g borne kiseline (FW = 61,83) i otapanja obje u približno 900 mililitara deionizirane vode. Zatim dodati 20 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0) i namjestiti otopinu do konačnog volumena od 1 litre. Ova otopina može se čuvati na sobnoj temperaturi, ali će se u starijim otopinama formirati precipitat. Čuvajte pufer u staklene boce i odbacite ako je formiran talog.

Radno rješenje TBE

Za agaroznu gel elektroforezu može se koristiti TBE pufer u koncentraciji od 0,5x (razrjeđenje 1:10 razrijeđene koncentracije). Razrijediti otopinu zaliha za 10 puta u deioniziranoj vodi. Konačne koncentracije otapala su 45 mM Tris-borata i 1 mM EDTA. Pufer je sada spreman za upotrebu u pokretanju agaroznog gela.

Što trebaš

Da biste napravili TBE tampon, trebat će vam samo četiri tvari. Preostale stavke na ovom popisu su oprema. Četiri supstancije potrebne su dinatrijeva sol EDTA, baza Tris, borna kiselina i deionizirana voda.

Što se tiče opreme, trebat će vam mjerač pH i standardi umjeravanja, prema potrebi. Uz to, trebat će vam 600 mililitara i 1500 mililitara čaša ili boca. Zaokruživanje vaših potreba za opremom su stupnjevani cilindri i promiješajte šipke i promiješajte ploče.

Provjerite oglasni prostor u laboratoriju koji ćete koristiti kako biste bili sigurni da imate sve što vam je potrebno prije nego što počnete. Ništa nije gore nego što se mora zaustaviti usred pripreme rješenja jer ste ponestali odgovarajuće materijale. Ako je vaš laboratorij u školi ili na radnom mjestu, provjerite kod odgovarajućeg osoblja da vidite da imaju sve predmete u zalihi. Na taj način možete uštedjeti vrijeme i energiju na kraju.