Saznajte kako napraviti TAE spremnik u nekoliko koraka

TAE pufer je otopina sastavljena od baze Tris, octene kiseline i EDTA (Tris-acetat-EDTA). Povijesno je najčešći pufer koji se koristi za elektroforezu agarozne gage u analizi DNA produkata koji su rezultat PCR amplifikacije, protokolima pročišćavanja DNA ili eksperimentima kloniranja DNA.

Ovaj pufer ima nisku ionsku jakost i niski puferski kapacitet. Najprikladnija je za elektroforezu velikih (> 20 kb) komada DNA i morat će se često zamijeniti ili recirkulirati duže (> 4 h) vrijeme vođenja gela. Imajući to na umu, preporučujemo da razmotrite nekoliko šarži međuspremnika.

S obzirom na to da je pufer jednostavan za izradu i koraci se mogu brzo provesti, stvaranje više od jedne serije odjednom ne bi trebalo biti osobito dugotrajan ili je teško izvaditi. Koristeći upute u nastavku, trebalo bi potrajati samo 30 minuta kako bi se napravio TAE pufer. Evo kako:

Pripremite otopinu od EDTA

Otopina EDTA (etilendiamin tetraoctena kiselina) je pripremljena ispred vremena. EDTA neće ući potpuno u otopinu dok se pH ne podešava na oko 8,0. Za 500 ml mljevene otopine 0,5 M EDTA, izvagati 93,05 dinata dinatrijeve soli EDTA (FW = 372,2). Otopiti u 400 ml ml deionizirane vode i podesiti pH natrijevim hidroksidom (NaOH). Napunite otopinu do konačnog volumena od 500 mililitara.

Brišite dionicu rješenja TAE

Napravite koncentriranu (50x) zalihu otopine TAE odmjeravanjem 242 grama Tris baze (FW = 121,14) i otapajući je u oko 750 mililitara deionizirane vode. Pažljivo dodati 57,1 ml ledene kiseline i 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0). Nakon toga namjestite otopinu do konačnog volumena od 1 litre. Ova matična otopina može se čuvati na sobnoj temperaturi. PH ovog pufera nije podešen i treba biti oko 8.5.

Pripremite radno rješenje TAE

Radna otopina 1x TAE pufera napravljena je jednostavnim razrjeđivanjem zaliha otopinom za 50 puta u deioniziranoj vodi. Konačne koncentracije otapala su 40 mM. Tris-acetata i 1 mM EDTA. Pufer je sada spreman za upotrebu u pokretanju agaroznog gela.

Što vam je potrebno za spremnik

Budući da izrada TAE pufera zahtijeva samo brz i jednostavan set uputa, broj potrebnih materijala za njega nije prekomjeran. Trebat će vam samo dinatrijeva sol EDTA, baza Tris i glacijalna octena kiselina.

Izrada tampona također zahtijeva pH metar i standarde umjeravanja, prema potrebi. Također će vam trebati 600 mililitara i 1500 mililitara čaša ili boca, kao i stupnjevi cilindara. Konačno, trebat će vam deionizirana voda, promiješati šipke i promiješati ploče.

Završavati

Gdje namjeravate napraviti tampon - na školskom mjestu, radilištu ili drugoj lokaciji, kao što je vaš dom? Provjerite oglasni prostor prije nego što počnete biti sigurni da imate sve gore navedene materijale za TAE međuspremnik.

Ako biste radije ne biste trebali platiti materijal, preporučujemo da se tampon izvan vaše kuće preporučuje. Možete jednostavno naručiti materijale koji vam trebaju online ili posjetiti specijaliziranu trgovinu za njih.