Kako se osušiti bakterička kultura (liofilizacija)

Sušenje zamrzavanjem, također poznato kao liofilizacija ili kriodiccacija, postupak je uklanjanja vode iz proizvoda nakon što je zamrznuta (i zatim stavljena pod vakuum), čime se led može mijenjati od krute tvari do pare, bez prolaska kroz tekuću fazu. Led (ili druga zamrznuta otapala) se uklanjaju iz proizvoda kroz proces sublimacije i uklanjaju se molekule vezane vodom kroz proces desorpcije.

Osnove liofilizacije

Jedan od najboljih načina za pohranu bakterijske, gljivične, kvasne ili druge mikroorganizme kulture za dugo vremena je korištenje procesa sušenja zamrzavanjem. Ovaj kratki laboratorijski postupak može se poduzeti s bilo komercijalno dostupnim zamrzavanjem-sušilicom koja će sačuvati vašu kolekciju kulture. Budući da je liofilizacija najsloženija i skupi oblik sušenja, postupak se obično ograničava na osjetljive, osjetljive materijale visoke vrijednosti. Tvari koje ne zamrzavaju zamrzavanje obično se mogu liofilizirati tako da hladna pohrana nije nepotrebna.

Ovaj proces može potrajati i do tri sata, i to 24 sata, ne uključujući vrijeme razvoja kultura.

Korak-po-korak procesa liofilizacije

1. Prvo, rastite kulturu preko noći, ili travnjak, mikroorganizma na LB ili drugu odgovarajuću hranjivu agar ploču.
2. Zatim, pričvrstite sterilne bočice s krupnim kapicama autoklaviranjem ispred vremena, s kapicama (gumenim čepovima) koje se leže na vrh. Stavite naljepnice s papirima s identifikacijom kulture unutar cijevi prije autoklaviranja. Alternativno, koristite cijevi s kapicama za sterilnost.
3. Dodati 4 mL liofilizacijskog pufera na ploču. Ako je potrebno, stanice se mogu suspendirati pomoću sterilne staklene šipke.

1. Brzo prenesite suspenziju kulture u sterilizirane bočice. Dodajte približno 1,5 ml po bočici. Zatvorite gumenom kapicom.
2. Zamrzite suspenziju kulture unutar bočica postavljanjem bočica u zamrzivač -20 stupnjeva Celzijusa.
3. Jednom kada su kulture zamrznute, pripremite zamrzivač za sušilicu tako što ćete ga uključiti i omogućiti vrijeme da se odgovarajuće temperature i vakuumski uvjeti stabiliziraju. Učinite to sukladno uputama proizvođača za određenu vrstu zamrzivača koji koristite.
4. Pažljivo i aseptično stavite kapice bočice labavo na vrh bočica tako da vlaga može pobjeći tijekom procesa sušenja zamrzavanjem i staviti bočice u komoru za sušenje zamrzavanjem. Nanesite vakuum u komoru prema uputama proizvođača.
5. Dopustite da se vrijeme kulture potpuno liofilizira (isušuje). To može potrajati od nekoliko sati do preko noći, ovisno o volumenu svakog uzorka i koliko uzoraka imate.
6. Izvadite uzorke iz komore za zamrzavanje i sušenje u skladu s uputama proizvođača i odmah uklopite bočice gumenim kapicama, a zatim crimpne vrhove.
7. Spremite liofiliziranu kolekciju kulture na sobnoj temperaturi.

Proizvodi koje trebate

• Zamrzavanje kosu
• Nutrijent ili druge prikladne agarne ploče (i inkubator za uzgoj kulture)
• Stakleni štap
• Pufer za liofilizaciju
• Štrcaljke s gumenim čepovima s gumenim čepovima (i crimper za primjenu kapica)
• Zamrzivač

_{Referenca:SP Scientific. Osnovna načela sušenja zamrzavanjem. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/}