Važnost specifične aktivnosti u izolaciji proteina

Specifična aktivnost je izraz koji se koristi za mjerenje brzine reakcije enzima sa supstratom. Specifična enzimska aktivnost (specifična aktivnost za kratko) je mjera čistoće enzima i navedena kao jedinice / mg . Vrijednost postaje veća, jer enzimski pripravak postaje čišći jer je količina proteina (mg) tipično manja, ali brzina reakcije ostaje ista (ili se može povećati zbog smanjene smetnje ili uklanjanja inhibitora).

Mjerenje kinetike enzima

Kao malo pozadine, enzimi su proteini koji djeluju kao katalizatori u smanjenju količine energije za aktiviranje reakcije. Aktivacijska energija je energija koja je potrebna da bi se reakcije "započele" jer se mnoge reakcije ne događaju vrlo brzo (ili se uopće događaju) ako su termodinamički moguća.

Enzimi kataliziraju specifične reakcije na određenom mjestu (poznat kao aktivno mjesto) gdje se reaktanti vežu i reagiraju kako bi generirali produkte. Podloge imaju aktivne web stranice koje su specifične samo za njih, tako da se druge tvari ne vežu niti reagiraju na istom mjestu. Poput zaključavanja i ključa, svaki enzim će katalizirati samo jednu specifičnu reakciju (uz neke iznimke).

Specifična aktivnost se koristi u metodama izolacije bjelančevina kako bi se označio postotak pročišćavanja. Važno je znati ovu jedinicu prilikom nabave enzima kako biste točno naznačili koliko je čisti enzim koji dobivate.

Kada se mjeri kinetika enzima (brzina reakcije enzima sa supstratom ili površinom), specifična aktivnost se definira kao količina supstrata koju enzim pretvara (reakcije katalizirane), po mg proteina u pripravku enzima, po jedinici vremena.

Primjer specifične aktivnosti bio bi:

• Specifična aktivnost izoliranog enzima mjerena je pri 150 molova / min / mg proteina prije pročišćavanja i 800 umoles / min / mg nakon pročišćavanja.

Specifična aktivnost važna je mjera enzimske čistoće. Različite šarže čistog enzima trebale bi imati iste vrijednosti, pa čak i razrjeđivanje enzimske otopine više puta imaju identične specifične vrijednosti aktivnosti iako će biti različite vrijednosti enzimskih aktivnosti. To je zato što kod izračunavanja specifične aktivnosti jednakovrijedni su brojitelji (jedinice / ml) i nazivnik (mg / ml).

Specifična aktivnost je vrlo različita od aktivnosti, ali izračun specifične aktivnosti još uvijek ovisi o vrijednosti aktivnosti. To znači da navedena specifična vrijednost aktivnosti također ovisi o definiciji enzimske jedinice.

Šarže enzima koji imaju nižu vrijednost od očekivanih specifičnih aktivnosti mogu sadržavati enzimske molekule koje su postale promijenjene ili pomiješane s nečistoćama.

Čimbenici koji utječu na enzimsku aktivnost

Moguće je da jedan enzim može imati različite mjerene vrijednosti aktivnosti kada se mjeri u različitim laboratorijima (to jest, stvarne razlike u mjerenoj aktivnosti, a ne vidljive razlike uzrokovane upotrebom različitih jedinica definicija).

Način provođenja analize (metoda ispitivanja za određivanje čistoće enzima) utjecat će na iskazane vrijednosti aktivnosti. Na primjer, enzimi su općenito aktivniji između temperatura od 37 stupnjeva Celzijusa u usporedbi s na 20 stupnjeva Celzijusa, pa ako se ispitivanje vrši na 21 stupnjeva Celzija, vrijednosti će se razlikovati od testova koji se provode na temperaturi od 32 stupnja Celzijusa , ispitivanja se provode na temperaturi između 20-37 stupnjeva Celzijusa).

Dakle, definicija enzimske jedinice biće bolje izražena kao 1 jedinica (U) je količina enzima koji katalizira reakciju od 1 nmol supstrata po minuti u standardnim uvjetima.